分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)b為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進(jìn)行定量分析。
你可以用uv紫外可見分光光度計測定定三種農(nóng)藥的波長在某溶液中的zui大、zui小吸收波長。
配制溶液－在光譜檢測項下進(jìn)行－調(diào)整檢測光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度zui大處對應(yīng)波長為zui大吸收波長，吸光度zui小處對應(yīng)的波長為zui小吸收波長。
1.光源燈;2.濾光片;3.球面反射鏡;4.入射狹縫;5.保護(hù)玻璃;6.平面反射鏡;7.準(zhǔn)直鏡;8.光柵;9.保護(hù)玻璃;10.出射狹縫; 11.聚光鏡;12.試樣室; 13.光門;14.光電管.
分光光度計工作原理:
由光源燈(1)發(fā)出連續(xù)輻射光線,經(jīng)濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像,光束通過入射狹縫(5)經(jīng)平面反射鏡(6)到準(zhǔn)直鏡(7)產(chǎn)生平行光,射至光柵(8)上色散后又以準(zhǔn)直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續(xù)光譜,由出射狹縫選擇射出一定波長的單色光,經(jīng)聚光鏡(11)聚光后,通過試樣室(12)中的測試溶液部分吸收后,光經(jīng)光門(13)再照射到光電管(14)上.調(diào)整儀器,使透光度為,再移動試樣架拉手,使同一單色光通過測試溶液后照射到光電管上.如果被測樣品有光吸收現(xiàn)象,光量減弱放大器處理,將光能的變化程度通過數(shù)字顯示器顯示出來.可根據(jù)需要直接在數(shù)字顯示器上讀取透光度(T),吸光度(A)或濃度(C).
uv紫外可見分光光度計基本操作:
(1)通電---儀器自檢----預(yù)熱20min;
(2)用鍵設(shè)置測試方式:透射比(T),吸光度(A),已知標(biāo)樣濃度方式(C)和已知標(biāo)樣濃度斜率(K)方式;
(3)波長選擇:用波長調(diào)節(jié)旋鈕設(shè)置所需的單色光波長;
(4)放樣順序:打開樣品室蓋,在1~4號放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑體),參比液,樣品液1和樣品液2.
(5)校具(黑體)校"0.000":將%T校具(黑體)置入光路,在T方式下按"%T"鍵,此時儀器自動校正后顯示"0.000"
(6)參比液校"100"%T或"0.000"A:將參比液拉入光路中,按"0A/T"鍵調(diào)0A/T,此時儀器顯示"BLA",表示儀器正在自動校正,校正完畢后顯示"100"%T或"0.000"A后,表示校正完畢,可以進(jìn)行樣品測定.
(7)樣品測定:將兩樣品液分別拉入光路中,此時若在"T"方式下則可依次顯示樣品的透射比(透光度)若在"A"方式下,則顯示測得的樣品吸光度.
uv紫外可見分光光度計的使用注意事項
(1) 預(yù)熱是保證儀器準(zhǔn)確穩(wěn)定的重要步驟。
(2) 比色皿的清潔程度,直接影響實驗結(jié)果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來水將用過的比色皿反復(fù)沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時,還要對比色皿進(jìn)行更精細(xì)的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3) 比色皿與分光光度計應(yīng)配套使用,否則會引起較大的實驗誤差. 比色皿不能單個調(diào)換 1.3 7200型光柵分光光度計的使用注意事項。
(4) 比色皿內(nèi)盛液應(yīng)為其容量的2/3,過少會影響實驗結(jié)果,過多易在測量過程中外溢,污染儀器. 比色皿中試樣裝入量應(yīng)為2/3～3/4之間。
(5) 拿放比色皿時,應(yīng)持其"毛面",杜絕接觸光路通過的"光面".如比色皿外表面有液體,應(yīng)用綢布拭干,以保證光路通過時不受影響。
(6) 若待測液濃度過大,應(yīng)選用短光徑的比色皿,一般應(yīng)使吸光度讀數(shù)處于0.1～0.8范圍內(nèi)為宜.由于測定空白,標(biāo)準(zhǔn)和待測溶液時使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。
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